Bonjour, vu l'echec cuisant de ma première inoculation où tous mes pots ont été contaminés (en même temps fallait s y attendre j'ai fais ça dans ma cuisine, avec mes chiens, en nettoyant juste le plan de cuisine et j'ai fais ça à l'air libre, la fenêtre ouverte)... Donc cette fois çi, j'ai fais une boxe "stérile", j'ai lavé toute ma maison, fermé les fenêtres, je me suis débarrassée des chiens (non non je ne les ai pas jeté par la fenêtre du 3eme étage promis), j'ai mis des habits propres un masque, des gants latex etc.... j'ai mis du spray à l'alcool à 70 pur partout, sur tous les ustensiles, toutes les surfaces à 1m du lieu de travail, à l'intérieur de la boxe etc.... jusqu'ici tout va bien. Mais arrive le moment de l'inoculation: les manipulations ont été hyper compliquées avec les gants mappa! j'arrivais pas à retirer le sparadrap micropore des trous, pour dérouler le rouleau et couper un bout je vous raconte pas la galère... donc pas très hygénique car beaucoup de manip pour rien... et deuxième problème: mon chalumeau de cuisine pour désinfecter l'aiguille entre chaque pot à très mal marché pour cause de non oxygène dans un milieu petit et clos
!!! Comment faites vous pour avoir du feu dans une boxe stérile?
Bon pour les gants effectivement, c'était pas l'idée du siècle, impossible de manipuler quoi que ce soit avec ça, il va falloir que tu les enlèves et que tu gardes juste les trous. Après tu peux manipuler à main nues bien lavées ou juste avec des gants en latex à usage unique. Il faut effectivement bien fermer les fenêtre pour éviter au maximum les courants d'air. Pour les chiens si ton espace de travail est propre et que tu l'es aussi ça devrait pouvoir le faire. Le spray à l'alcool à 70° c'est le bon réflexe sur ça rien à redire.
Et pour le chalumeau, il faut faire ça en dehors de la boite car ça créer beaucoup de turbulences et de mouvements d'air dans la boite et c'est justement ce qu'il faut éviter.
Et les contaminations peuvent également venir d'autres étapes, et notamment de spores dans la seringue
Dernière modification par MikeO'ryize (14 octobre 2021 à 00:08)
d'accord! mais du coup ça m'oblige a ouvrir et fermer la boite pleins de fois et à faire rentrer de l'air de l'extérieur alors que là c'était en vase clos du début à la fin!
Bon du coup j'ai commandé une serre de balcon d'1m sur 1m70 au sol pour faire un mini labo complètement fermé (hyper facile à désinfecter entièrement). ça plus la boxe ça devrait le faire. Je vais donc enlever les gants mappa et laisser des trous , et j'irai aux gants latex (ce qui résoudra le problème de l'oxygène ET le problème de maniabilité.
Peut être que cette deuxième tentative sera quand même mieux que la première.... sinon la troisième sera la bonne
Nan bah dans ce cas là il vaut mieux le faire à l'intérieur de la boite que de l'ouvrir ahah
Normalement il n'y a même pas besoin d'aller aussi loin dans les précautions, pour la stérilité la boite est sensée suffire. Mais après trop de précautions ça ne peut pas faire de mal
C'est la bonne mentalité à adopter quand on commence, c'est impossible d'avoir tout bon du premier coup, c'est la pratique qui fait le succès :)
Dernière modification par MikeO'ryize (15 octobre 2021 à 15:34)
oui là je me suis aperçue que j'ai inoculé les spores dans la couche de casing.... je suis pas allée assez loin avec l'aiguille sur la plupart des pots..... encore une erreur a rectifier la prochaine fois....
Ah mince c'est problématique, et ça peut effectivement être une source d'échec, c'est bien que tu l'ai identifiée. Mais ça explique quand même pas les contaminations.
Et je me répète peut-être, mais les spores ne sont jamais propres, qu'elles viennent d'empreintes ou de seringues achetées sur des smartshop. Le seul moyen de les nettoyer vraiment pour s'assurer que tout est clean c'est de passer par un travail d'isolation sur gélose. Ca ne veut pas dire qu'il est absolument obligatoire pour réussir, mais ça veut dire que les chances de succès ne peuvent pas être maximales tant que ce travail n'est pas fait. Et tu pourras avoir les meilleures conditions de stérilité du monde pour manipuler, si tes spores sont contaminées, tes cultures le seront également
D'accord! je pensais que je pouvais avoir plus confiance dans les smart shop que dans mes techniques à moi! J'imaginais que leurs seringues de spores étaient forcément "pures" (indemnes de toutes contaminations) car ils doivent avoir du matériels et des protocoles hight teck!
Je comptais venir à la culture sur gélose après avoir en main la technique d'inoculation, car à terme je veux faire mes propres roulements sans avoir besoin de commander.
J'ai déjà eu quelques surprises aussi en partant de seringues de spores de smartshop et je pensais également au début que les spores étaient forcément clean. Mais le process ne peut que très difficilement se faire dans des condition de stérilité même avec des moyens. Du coup le plus tôt on commence le travail sur gélose, le plus vite on économise des sous et on met toutes les chances de son côté pour réussir. Surtout qu'il y a des techniques pour faire des géloses avec 3 fois rien sans se ruiner genre pot de sauce en plastique comme au kebab, flocons de purée, grenadine et agar-agar et le tour est joué
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